原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過(guò)程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。
原位雜交的特點(diǎn)是雜交在顯微鏡載玻片上中期染色體標(biāo)本上進(jìn)行。所謂原位即指標(biāo)本上DNA原位變性,在利用放射性或非放射性標(biāo)記的已知核酸探針雜交后,通過(guò)放射自顯影或非放射性檢測(cè)體系來(lái)檢測(cè)染色體上特異DNA或RNA順序,可用放射性顆粒在某條染色體的區(qū)帶出現(xiàn)的高頻率或熒光的強(qiáng)弱來(lái)確定探針的位置,從而進(jìn)行準(zhǔn)確的基因定位。
原位雜交的應(yīng)用范圍:
①細(xì)胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位,可用于基因圖譜,基因表達(dá)和基因組進(jìn)化的研究;
②感染組織中病毒DNA/RNA的檢測(cè)和定位,如EB病毒mRNA、人類乳頭狀瘤病毒和巨細(xì)胞病毒DNA的檢測(cè);
③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)及其變化的檢測(cè);
④基因在染色體上的定位;
⑤檢測(cè)染色體的變化,如染色體數(shù)量異常和染色體易位等;
⑥分裂間期細(xì)胞遺傳學(xué)的研究,如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳病基因攜帶者的確定,某些腫瘤的診斷和生物學(xué)劑量測(cè)定等。